大家看過(guò)之前的文章后，對(duì)反相離子對(duì)色譜法已經(jīng)有很清晰的認(rèn)識(shí)了，今天小編為大家分享一個(gè)實(shí)際案例：

色譜柱：Ultimate^® LP-C18（4.6×250mm，5μm）。

流動(dòng)相：0.1%七氟丁酸溶液/乙腈；

檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；

柱溫：30℃；

流速：1mL/min；

進(jìn)樣量：10μL。

討論：

甲酰肼與4-氨基三氮唑合并，3-氨基三氮唑峰前有倒峰干擾，三氮唑峰型不好，甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離，增加離子對(duì)試劑濃度。

流動(dòng)相：0.3%七氟丁酸溶液/乙腈

討論：

增加離子對(duì)試劑濃度分離效果和基線都得到很好的改善，但約9分鐘處有倒峰，甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離，增加離子對(duì)試劑中碳原子的數(shù)量。

流動(dòng)相：10mmol/L KH₂PO₄(含1g/L辛烷磺酸鈉，pH1.6)/乙腈=85/15 

討論：

改用辛烷磺酸鈉以后無(wú)改善，改變離子對(duì)試劑種類。

流動(dòng)相：10mmol/L KH₂PO₄(含2g/L己烷磺酸鈉，pH1.5)/乙腈=90/10

討論：

第一，二個(gè)峰分離良好，其他物質(zhì)需要改善，調(diào)整有機(jī)相的比例。

流動(dòng)相：10mmol/L KH₂PO₄(含2g/L己烷磺酸鈉，pH1.5)/乙腈=95/5

測(cè)試結(jié)果：

保留及分離情況均良好，分離*，三氮唑峰形能滿足峰面積定量要求。

討論：

在分離甲酰胺等6個(gè)物質(zhì)時(shí)，這幾個(gè)均為極性較大，反相色譜上保留弱，要達(dá)到六個(gè)成分的分離，首先需增加其保留，再根據(jù)情況，調(diào)整離子對(duì)試劑的量，pH值，有機(jī)相種類與濃度以達(dá)到分離，在實(shí)驗(yàn)中選擇了耐受強(qiáng)酸條件的Ultimate^® LP-C8（pH耐受范圍0.5-8）柱，通過(guò)調(diào)整離子對(duì)試劑的種類，濃度，有機(jī)相的比例，使得各物質(zhì)得到良好的分離，滿足日常檢測(cè)需求。